ELISA結(jié)果的鑒定
一,準(zhǔn)確性:免疫學(xué)專(zhuān)一性的測(cè)定。用免疫擴(kuò)散、交叉電泳和免疫電泳測(cè)定抗原和抗體的純度。如果是測(cè)定抗原(或半抗原),一般將放射免疫測(cè)定法(RIA)的結(jié)果作比較;如果是測(cè)定抗體,一般將免疫熒光法(IFA)的結(jié)果比較。用其他實(shí)驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)來(lái)核證。例如病毒侵染動(dòng)、植物機(jī)體后,會(huì)出現(xiàn)一系列病理變化,這些病理數(shù)據(jù)與病毒侵染量如存在線性關(guān)系,那么用ELISA測(cè)定病毒的量應(yīng)與病理數(shù)據(jù)的變化相一致。多次實(shí)驗(yàn),將每次ELISA結(jié)果進(jìn)行比較。
二,度:將同一樣品進(jìn)行一系列不同濃度的測(cè)定,得到濃度范圍廣泛的一條曲線,選擇該曲線坡度陡、重復(fù)性好的區(qū)域作為測(cè)定范圍。對(duì)ELISA測(cè)定范圍的確定,有益于選擇實(shí)際使用的合適濃度。
三,靈性性:ELISA的靈敏性高,它對(duì)許多抗原的測(cè)定,靈敏度可達(dá)1-10ng/ml。作出ELISA某種方法靈敏度高低的結(jié)論要慎重,因?yàn)樵S多因素會(huì)影響ELISA的靈敏度,例如抗體的效價(jià)、酶的活性、酶標(biāo)記抗體的質(zhì)量、反應(yīng)的時(shí)間與溫度、載體的吸附力、底物的濃度與pH等。只有在條件嚴(yán)格一致的情況下才能作出比較。