CCK-8試劑盒是一種基于WST-8(化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)而廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。
CCK-8試劑盒產品用途
用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。
CCK-8試劑盒基本原理
該試劑中含有 WST-8【化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2 H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體 1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓*(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產物(Formazan dye)。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。
CCK-8試劑盒的使用及保存方法分享
1. 未開封的試劑盒:所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意,收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液,終止液保存于4℃,其他試劑保存于-20℃。
2. 使用后的試劑盒:剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存,開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。
注意:
試劑盒內酶標條可拆卸,按實驗需求可分多次使用;使用后的剩余試劑盒建議在*實驗后 1個月內使用完畢。產品過期時間以盒子上的標簽為準,保質期內所有組分都確保是穩(wěn)定的。
標本的采集與保存
1. 血清:
將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4oC 過夜,然后 1000×g 離心 20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20oC 或-80oC 保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:
用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的 30 分鐘內于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20oC或-80oC 保存,但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿:
1) 取適量組織塊,于預冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
2) 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,加入5-10mL 預冷PBS 進行充分研磨,該過程需在冰上進行(有條件實驗室可選用機器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復凍融 進一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復凍融法可重復2次)。
3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘,留取上清即可檢測。