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Easy-Lowry蛋白定量試劑盒說明書
Easy-Lowry Protein Assay Kit
Easy-Lowry蛋白定量試劑盒
目錄號：K2341
保存：BSA 標(biāo)準(zhǔn)品：2-8℃
其 它 組 分：室 溫
組分說明
Cat. No. K2341
Kit Size 1000 次/微孔，50 次/試管
試劑 A 50 ml
試劑 B 25 ml
BSA 標(biāo)準(zhǔn)品 （2 mg/ml） 2 ml
產(chǎn)品簡介
Easy-Lowry 蛋白定量試劑盒是一種操作簡便快捷的 Lowry 法蛋白定量試劑盒，可用于多種不同緩沖系統(tǒng)以及各種不同蛋白質(zhì)的定量檢測。Easy-Lowry 蛋白定量試劑盒是在 Improved-Lowry 蛋白定量試劑盒基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化改良的產(chǎn)品，其保留了Improved-Lowry 抵抗干擾能力較強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，并進(jìn)一步簡化了操作步驟，減少了檢測時間，并且能得到與mproved-Lowry 蛋白定量接近的定量結(jié)果，其檢測范圍為 0-2000 μg/ml。
注意事項
1. 本產(chǎn)品可以采用分光光度計（試管檢測法）或者酶標(biāo)儀（微孔檢測法）測定蛋白濃度。
2. 建議每次測定蛋白樣品時，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以獲得準(zhǔn)確數(shù)據(jù)。
3. BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理鹽水稀釋）。
4. 如待測樣品中含較多的干擾物質(zhì)（具體見附表 1），可采用 Bradford 法蛋白定量試劑盒（K0013）或其他蛋白定量產(chǎn)品。
操作步驟
1. 稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品：用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品。
管號 稀釋液用量（μl）BSA標(biāo)準(zhǔn)品用量（μl） BSA標(biāo)準(zhǔn)品終濃度（μg/μl）
A 0 200 2
B 200 200 1
C 200 200（從B管中?。? 0.5
D 200 200（從C管中取） 0.25
E 200 200（從D管中取） 0.125
F 200 0 0（空白）
2. 稀釋試劑 B：將試劑 B 用去離子水稀釋 8 倍混勻待用。
3. 定量檢測：
3a. 試管檢測法（蛋白濃度檢測范圍：0-2 μg/μl）
1）按上表，將稀釋好的 A-F BSA 標(biāo)準(zhǔn)品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各 200 μl 分別加到作好標(biāo)記的試管中。
2）向各試管中加 1 ml 試劑 A 迅速振蕩混勻，室溫準(zhǔn)確放置 10 分鐘。
3）向各試管中加入 4 ml 稀釋過的試劑 B，迅速在渦旋儀上混勻，室溫靜置 30 分鐘。
4）用分光光度計測定 750 nm 下的吸光度值。
5）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣品中的蛋白濃度。
3b. 微孔檢測法（蛋白濃度檢測范圍：0-2 μg/μl）
1）按上表，將稀釋好的 A-F BSA 標(biāo)準(zhǔn)品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各 5 μl 分別加到作好標(biāo)記的 96 孔板微孔中。
2）向各微孔中加 50 μl 試劑 A，迅速用酶標(biāo)儀振蕩混勻，室溫準(zhǔn)確放置 10 分鐘。
3）向每孔中加入 200 μl 稀釋過的試劑 B，迅速用酶標(biāo)儀振蕩混勻，室溫靜置 30 分鐘。
4）用酶標(biāo)儀測定 750 nm 下的吸光值。
5）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣品中的蛋白濃度。
注意：
1）建議以去除背景值后的吸光值讀數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2）由于操作誤差導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)品讀數(shù)嚴(yán)重偏離線性曲線的應(yīng)舍去。
3）未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中計算得出, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。
4）如果得到的蛋白濃度不在檢測范圍內(nèi)，請重新稀釋樣品后再次測定。
附表 1.干擾物附表
化合物 耐受濃度 化合物 耐受濃度
緩沖液 去垢劑及變性劑
磷酸鉀 0.03 M 去氧膽酸鈉 0.0625%
甘氨酸 0.25 mM CHAPS 1 mM
HEPES 2.5 μM 辛葡糖 干擾
MES 25 μM SDS 1.25%
MOPS 25 μM Triton X-100 0.25%
Na +-檸檬酸 2.5 μM 糖類
PIPES 5 μM 葡萄糖 30 mM
磷酸鈉 0.25 μM 蔗糖 10 μM
螯合劑
TES 1 mM
Tris 250 μM EDTA 125 μM
鹽類 EGTA 干擾
還原劑
硫酸銨 28 μM
NaCl 30 μM β-巰基乙醇 1.75mM
尿素 200 μM DTT 50 μM
其他
極性化合物
丙酮 1.25% 丙烯酰胺 1.25 mg/ml
DMSO 6.20% DNA 190 μg/ml
乙醇 12.50% 脂類 25mM
1,2-亞乙基二醇 0.25% 兩性電解質(zhì) 干擾
甘油 25% 中性 TCA 12.5 mg/ml
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
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